储存条件 4℃保存，一年有效（避免冷冻）。

产品介绍 

     LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 是一种非 常高效的新型转染试剂，细胞毒性更低，转染效果更佳，达到了国际最主流转染试剂的转染效果。适用于把质粒、 siRNA 或其它形式的核酸包括 DNA、RNA、寡核苷酸转染 到真核细胞中。

     LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 对于常见的 哺乳动物细胞具有非常高的转染效率、重复性好、操作简单、 无明显的细胞毒性，并且对于贴壁细胞和悬浮细胞都适用。

     LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 转染试剂的 使用方法和常用的 Lipofectamine?2000 Reagent 完全一致， 转染效率比 Lipofectamine? 2000 Reagent 更高。

     LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 转染试剂不 仅适用于质粒、siRNA 等单一成分的细胞转染，也适合多个 质?；蛘咧柿Ｓ?siRNA 等的组合转染。

     LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 转染试剂转 染过表达质粒后，通常 24-48 h 后达到较高的蛋白表达水平， 并且很多情况下蛋白表达量在转染后 48 h 显著高于转染后 24 h；转染 siRNA 通常 3-5 天后对于目的基因的下调水平会 比较理想。

     LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 转染试剂转 染细胞时，基本不受细胞培养液中血清影响，即可以在血清存在的情况下进行细胞转染。但为了取得最佳的转染效果， 推荐转染时使用不含抗生素培养液。转染后不必去除转染液， 或者改变或添加培养基，但转染 4-6 h 后可去除转染液。

使用方法

     1. DNA 转染 下列步骤适用于 24 孔板培养的哺乳动物细胞，至于其 他培养材料，请参考转染规模调整，所有数量和体积均是按孔计算。大部分细胞系所使用的 DNA（μg）与 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent（μL）的比值为 1: 2 到 1: 3， 转染高密度细胞可获得高转染效率、高表达水平和低细胞毒 性。优化转染是必需的（见优化质粒 DNA 转染）。 

A. 贴壁细胞：转染前一天每孔 0.5-2×105个细胞接种于 500 μL 不含抗生素的培养基中，在转染时细胞可长至 70-90%汇合度。

悬浮细胞：在配制转染液前每孔 4-8×105 个细胞接种于 500 μL 不含抗生素的培养基中。 

B. 转染液制备，每孔细胞用量如下：

     a. 用 50 μL Opti-MEM 低血清培养基（或者其他无血 清培基） 稀释质粒 DNA，轻轻混匀。 

     b. 使用前轻轻摇匀 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent ， 然 后 取 适 量 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 在 50 μL Opti-MEM 培养基中稀释，室温孵育 5 min。 注意：请在 25 min 内进行下一步操作。 

     c. 将前两步所稀释的 DNA 和 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 混合（使总体积为 100 μL），轻轻混匀， 室温放置 20 min（溶液可出现浊）。

     注意：转染复合物常温下可在 6 h 内保持稳定。

C. 在每孔细胞中加入 100 μL 转染液，轻轻摇匀。 

D. 37℃培养 18-48 h 后检测基因表达，转染 4-6 h 后可更换 培养基。 对于稳定转染，在转染 24 h 后以 1: 10 稀释接种于新鲜培养基中，第二天可加入选择培养基。

优化 DNA 转染 

     可通过改变细胞密度、质粒 DNA 密度和 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 浓度以优化转染。要保证细胞融合 在 90% 以 上 ， DNA (μg): LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent (μL)可在 1: 0.5 到 1: 5 之间进行调整。

2. RNAi 或 siRNA 转染 

     下列步骤适用于 24 孔板培养的哺乳动物细胞，至于其 他培养材料，请参考转染规模调整，所有数量和体积均是按 每孔计算。

A. 转染前一日，将细胞接种于 500 μL 不含抗生素的培养基 中，使其在转染时长至 30-50%汇合度。 

B. 转染液制备，每孔细胞用量如下：

     a. 用 50 μL Opti-MEM 低血清培养基（或者其他无血 清基）稀释 20 pmol siRNA（转染时 siRNA 终浓度为 33 nM）， 轻轻混匀。

     b. 使用前轻轻摇匀 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent ， 然 后 取 1 μL LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 在 50 μL Opti-ME I 培养基中稀释，室温孵育 5 min。 

     注意：请在 25 min 内进行下一步操作。 

     c. 将前两步所稀释的 RNA 和 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 混合（使总体积为 100 μL），轻轻混匀， 室温放置 20 min（溶液可出现浑浊）。

C. 在每孔细胞中加入 100 μL 转染液，轻轻摇匀。37℃培养 24-96 h 后检测基因表达，转染 4-6 h 后可更换培养基。 

siRNA 转染优化

     可 调 整 siRNA 与 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 的用量以优化转染，在 24 孔板，siRNA 可在 10-50pmol 之间调整，LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 可在 0.5-1.5 μL 之间调整，在增加细胞密度时也应优化转染 剂量。

转染规模调整 

不同培养材料转染液、细胞和培养基的用量按照培养 材料面积换算。在 96 孔板细胞高通量自动分析系统，推荐 每孔使用 50 μL 转染液。

注意：在 96 孔板，可将细胞直接接种于转染液中以实 现快速转染，直接在培养板中配制转染液 100μL，直接将细胞加入培养板中，其密度为上述方法的 2 倍，细胞在转染液中可正常贴壁。

注意事项

1. 使用高纯度的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率。 

2. 转染前细胞必须处于良好的生长状态。 

3. 需自备不含抗生素的无血清培养液或 Opti-MEM?培养 液或普通的 DMEM 培养液。

4. LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 转染试剂不能 vortex 或离心，宜缓慢晃动混匀。 

5. LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 转染试剂使用 后请立即盖好盖子，避免长时间暴露在空气中，影响转染效 率。

6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。